10.1 Preparación de cromosomas

Capítulo 10

Los cromosomas sólo son visibles y adecuados para un análisis de cromosomas clásico durante la metafase del ciclo celular. Necesario obtener las células en un fuerte crecimiento para preparar suficiente cromosomas para la observación microscópicas.

Cultivo de linfocitos es el método más común para obtener muchas células en la metafase al mismo tiempo. Una tasa mitótico del 1 porciento es común en una cultura buena. Normalmente, los linfocitos son células inactivas, por lo tanto tienen que ser estimuladas para dividirse. El mitogene más comúnmente utilizados (agente estimulante de mitoses) es PHA (fitohemaglutinina), que es un extracto de fríjoles.

Los procedimientos siguientes se utilizan para la 'cultura de sangre' y las preparaciones de cromosomas con el método del aire seco:

También se pueden hacer Cromosomas a partir de cultivos de células de fibroblastos, que puede ser establecido a partir de un clip de oreja o el tejido muscular subcutáneo. Después de una autopsia, examen de los tejidos de los pulmones o los riñones también pueden utilizarse para establecer una cultura de células primarias. La cultura debe establecerse dentro del primer día después de haber obtenido la prueba. El cultivo celular se establece en un tubo Falcon mediante la adición de medios de crecer y algunos trozos de tejido, que han sido picados con tijera. Normalmente tiene que crecer más de 10 días antes de que se haya desarrollado una cantidad suficiente de células para preparaciones de cromosomas. Los medios de crecimiento son los mismos que se menciona en virtud de la 'cultura de sangre', pero aquí no hay que añadir PHA.

Para identificar los pares de cromosomas individuales es necesario de un coloración específica. Esto se hace por añadiendo un análogo de la timidina -Bromo-desoxi-uracilo (BrdU) a las células en crecimiento 6-7 horas antes de la cosecha, dependiendo de la tasa de crecimiento. Después de la coloración con Acridina naranja la incorporación de BrdU debería dar cromátidas débilmente coloreadas en las zonas que reproducirse después de la adición de BrdU. Considerando que el anterior áreas replicado dar un color brillante fuerte. Por medio de esta coloración del X cromosoma inactivo en la hembra normal puede ser demostrado, como el inactivo cromosoma X tiene una replicación muy tarde en el ciclo celular, Ver imagen en la sección 2.2

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