10.4 Identifikation af kromosomer med kromosom paint etc.

Foregående side

I figur 10.7 er vist et paint på grisekromosomer med DNA fra en hamstercellelinie der indeholder p-armen af grisekromosom 12. To kromosomer er painted, det er de identiske stykker på de to homologe kromosomer.

Figur 10 7. Paint på grise kromosomer med p-armen af kromosom 12

Paint metode er i store træk følgende (Fluorescens in situ hybridisering, FISH):

• Opmærkning af probe med biotinilerede nucleotider
• Smeltning af probe og mål-DNA (kromosompræperatet)
• Hybridisering af probe og mål-DNA under dækglas i op til flere døgn
• Afvaskning af overskydende probe
• Et lag af avidin (avidin binder meget stærkt til biotin)
• Farvning ved hjælp af fluorescens mærket antistof mod avidin
• Fotografering v.h.a. fluorescens mikroskop

Når der paintes med et mindre stykke DNA, f.eks. et 40 kb stort insert i en cosmid, fås meget distinkte resultater i form af 2 pletter, en på hver af de to kromatider på de to homologe kromosomer se her.

Link her for at se billede af kromosom-paint med humane kromosomer. Alle de humane kromosomer er sorteret, så man kan købe rent DNA fra alle enkelte kromosomer. Når de mærkes op forskelligt, får hvert kromosompar sin egen farve. Denne teknik gør det til en enkelt sag at identificere de kromosomer, der er involverede i komplekse translokationer.

Ved hjælp af kromosom-paint kan der identificeres homologi mellem arter, se Figur 10.8 med minkkromosomer (til venstre), og de samme kromosomer (til højre) er hybridiseret med human kromosom 14. En tabel over homologien mellem kromosomerne hos 4 husdyrarter og mennesker er vist her

Figur 10 8. Paint på mink kromosomer med humant kromosom 14. I venstre side er der DAPI farvede kromosomer til identifikation mens højre side viser paintet, der er på p-arm af kromosom 13.

Næste side